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摘要
克罗诺杆菌属主要感染免疫力低下的人群，特别是婴幼儿，能引起脑膜炎等问题，致死率较高。实验选取克罗诺杆菌中atpD，gyrB，infB，fusA和glnS管家基因作为靶序列，构建质粒标准样品快速检测克罗诺杆菌。通过测序和菌落聚合酶链式反应（polymerase chain reaction， PCR）对构建的重组质粒进行验证，传15代后对重组质粒进行测序验证质粒稳定性。制备的atpD，gyrB，infB，fusA和glnS质粒标准样品，对其进行定性实验，并检测其检测限和稳定性，然后使用atpD，gyrB，infB，fusA和glnS质粒标准样品对婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌进行检测。通过菌落PCR和测序结果显示atpD，gyrB，infB，fusA和glnS质粒标准样品制备成功。PCR体系对质粒标准样品检测具有特异性，atpD，gyrB，infB，fusA和glnS检测限分别为1.14×10~(6)，1.07×10~(7)，1.09×10~(7)，1.73×10~(5)，7.54×10~(5)拷贝/μL。质粒冻干粉可以在-20℃，4℃，25℃稳定保存90天。将质粒标准样品用于23份婴幼儿奶粉样品检测，检测出1份具有gyrB管家基因。参考国标GB4789.40-2016的方法进行传统微生物分离检测，未检测出克罗诺杆菌。相较于传统方法质粒标准样品的应用极大提高了样品的检测效率。
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