报道一条具有pH敏感解吸附特征的羟基磷灰石结合肽序列

作者：邓鑫; 李瑛傑; 魏蔚; 杨焰; 马净植; 谢三祥^*

来源：华中科技大学学报(医学版), 2022, 51(02): 218-223.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2022.02.014

• 羟基磷灰石
• 羟基磷灰石结合肽
• 蛋白质吸附
• 滴度测试

目的 评价基于噬菌体展示技术的羟基磷灰石结合肽的解吸附特征。方法 采用成品羟基磷灰石(hydroxyapatite, HAP)作为结合底物，通过X射线衍射(X-ray diffraction, XRD)对其进行物相鉴定，提取噬菌体DNA测序读取展示肽的序列，扩增制备目标序列YSLHWGE(YSL)的单克隆储液，以肽库中随机挑选的序列VTDSKPK(VTD)为阴性对照；滴度测试测定投入回收比，免疫荧光法验证目标序列的标靶亲和力。参照标准淘选方案，在不同pH值(7.5、6.5、5.5、4.5)缓冲洗脱液中分析目标序列的解吸附特征。结果 YSL和VTD的单克隆储液扩增后滴度均达到1011pfu/10μL,符合后续实验要求。测序结果得到目标序列和随机序列分别为YSL和VTD。通过重复3次滴度测试计算投入回收比发现，目标序列YSL与HAP的亲和度较高，投入回收比为随机肽VTD投入回收比的17.5倍。这种结合亲和力也通过免疫荧光实验得以验证，结果显示YSL组羟基磷灰石粉末被荧光点亮的面积比例和平均吸光度分别为(71.98±2.30)%和(0.10090±0.00544),均显著高于VTD组的(49.95±2.28)%(P<0.01)和(0.04637±0.00117)(P<0.01);发现在不同pH值环境中，YSL解吸附释放的噬菌体数量占原吸附总量的比例均高于随机肽VTD解吸附的比例(P<0.01)。结论 羟基磷灰石结合肽序列YSLHWGE对结合底物羟基磷灰石有较好的亲和力且具有一定的随环境pH值变化的缓释能力。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 华中科技大学