多黏菌素抗性基因mcr-4/5/8实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：李一鸣; 王少林^*

来源：中国兽医杂志, 2021, 57(05): 65-132.

• 荧光定量PCR
• 多黏菌素
• 标准曲线
• mcr基因

多黏菌素是治疗多重革兰阴性耐药菌最重要的药物之一,近年来,其耐药性逐年持续上升。多黏菌素耐药基因mcr可以通过质粒传播,对人类健康和畜牧业生产造成了严重的威胁。本试验根据GenBank下载的多黏菌素耐药基因mcr-4、mcr-5和mcr-8的基因参考序列,设计特异性引物并验证其特异性,用SYBR Green I染料法建立实时荧光定量检测方法。将mcr-4、mcr-5和mcr-8基因克隆到pMD19-T载体上,构建标准质粒,再以标准质粒为模板建立荧光定量PCR反应的扩增曲线、标准曲线和熔解曲线。结果发现,扩增曲线平行且光滑;标准曲线线性关系良好,扩增效率接近100%,R2>0.99;标准品熔解曲线呈特异性单峰,表明本次试验构建的方法特异性好。本试验中多黏菌素抗性基因mcr-4、mcr-5和mcr-8实时荧光定量检测方法的建立,可以为未知样品中相应基因的检测提供依据。

• 单位
  中国农业大学