摘要
目的 探讨蛋白激酶Cδ(protein kinase Cδ,PRKCD)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的表达水平、临床意义及其潜在的作用机制。方法 从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库中下载HCC的表达数据和临床数据,分析PRKCD在HCC中的表达水平及其临床意义。收集25例HCC患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用免疫组化染色检测患者样本中的PRKCD蛋白表达水平。采用Western Blot及qRT-PCR法检测PRKCD在正常肝上皮细胞和肝癌细胞系中的表达水平。通过构建si-PRKCD慢病毒转染到Huh-7肝癌细胞中,采用CCK-8实验评估沉默PRKCD对肝癌细胞增殖活性的影响。采用划痕实验、Transwell侵袭实验明确PRKCD对细胞迁移和侵袭的影响。最后,通过Western Blot法检测PRKCD对上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition, EMT)关键蛋白(Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Slug)的内在调控作用。结果 TCGA数据库分析及免疫组化染色结果显示,肝癌组织中PRKCD的表达量显著高于癌旁组织(P<0.05)。Kaplan-Meier曲线分析显示PRKCD低表达患者的总生存率(overall survival, OS)、无病间隔期(disease-free interval, DFI)、无病生存期(disease-free survival, DFS)显著高于PRKCD高表达患者。与正常肝上皮细胞LO2相比,PRKCD在肝癌细胞Huh-7中的蛋白表达水平最高(P<0.05)。与对照组比较,沉默PRKCD后,PRKCD蛋白表达量显著减少(P<0.05)。肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05)。此外,沉默PRKCD后,Vimentin、N-cadherin、Slug蛋白表达降低,而E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。结论 PRKCD是肝癌的潜在不良预后标志物,沉默PRKCD的表达能够抑制Huh-7肝癌细胞的增殖和侵袭,其机制可能与上皮-间质转化过程有关。
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