红霉素合成蛋白的克隆和高表达研究

作者：于海楠; 汪志军; 梁晶丹

来源：基因组学与应用生物学, 2020, 1-6.

• 红霉素
• 蛋白表达
• 简并序列 Erythromycin
• Protein expression
• Degenerate sequence

文献报道红霉素合成蛋白DEBS2 (6-脱氧红霉内酯B合酶) (374 kD)在大肠杆菌中异源表达量比较低，难以开展后续纯化和结构等研究。为获得大蛋白的异源高表达，本研究通过PCR的方法，对编码红霉素合成蛋白DEBS2的基因起始5’端设计了起始密码子之后的十一个简并密码子序列，随机筛选获得在表达宿主BL21(DE3)中高表达的简并序列质粒，质粒命名为DEBS2-17。结果表明：mRNA的起始二级结构影响200 kD以上的蛋白质表达水平。本研究为开展红霉素合成蛋白的结构及生化研究奠定基础，同时对表达分子量200 kD以上蛋白具有一定借鉴意义。

• 单位
  生命科学技术学院; 上海交通大学; 微生物代谢国家重点实验室