牛乳过敏原β-乳球蛋白分离纯化方法优化及IgG结合能力分析

作者：杨艳; 于宁; 康文瀚; 张九凯; 孙爱东^*; 陈颖^*

来源：食品安全质量检测学报, 2022, 13(19): 6377-6384.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2022.19.022

• 牛乳过敏原
• β-乳球蛋白
• 分离纯化
• 鉴定
• IgG结合能力分析

目的 优化分离纯化方法,获得高纯度、高得率且具有良好IgG结合能力的β-乳球蛋白(β-lactoglobulin, β-Lg)。方法 以超速离心脱脂、等电点沉淀、硫酸铵沉淀为前处理方法,通过Sephadex G-75凝胶柱层析、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析纯化β-Lg,并对纯化条件进行优化,结合十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对β-Lg进行鉴定,采用蛋白质印迹法(Western blot)对其Ig G结合能力进行验证。结果 凝胶层析最佳洗脱条件为0.02 mol/L pH 6.8 Tris-HCl+0.15 mol/L NaCl,流速0.4 mL/min;阴离子交换层析最佳洗脱条件为0.05 mol/L pH 6.5 Tris-HCl+0～0.5 mol/L NaCl,流速0.5 mL/min;结合SDS-PAGE与LC-MS/MS鉴定,该条件下获得的终产物为β-Lg;该方法获得的β-Lg得率为54.89%,纯度为100%(SDS-PAGE),且具有良好的IgG结合能力。结论 本研究建立了一种简单、可重复的β-Lg分离纯化方法,在获得高纯度β-Lg的同时保持良好的IgG结合能力,为后续牛乳过敏及脱敏研究提供技术支撑。

• 单位
  北京林业大学; 中国检验检疫科学研究院