BVDV基因分型三重实时荧光定量RT-PCR方法的建立与应用

作者：彭雪松; 温永俊; 关平原; 徐晓静; 希尼尼根; 张志丹; 张七斤; 周伟光^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2021, (19): 84-152.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.02.0018

• 牛病毒性腹泻病毒
• 基因分型
• 敏感性
• 特异性
• 稳定性

为了快速检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)和区分不同基因型的BVDV,试验根据GenBank中BVDV的3种基因型5′端非翻译区(UTR)设计2对特异性引物和3个探针,优化引物和探针浓度,建立BVDV基因分型三重实时荧光定量RT-PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。采集28份犊牛鼻拭子和40份粪便拭子样品,应用建立的方法进行检测,并与普通RT-PCR方法进行比较。结果表明:扩增体系经优化,BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3的最佳引物浓度分别为350,350,200 nmol/L,最佳探针浓度分别为400,550,350 nmol/L,试验建立的三重实时实光定量RT-PCR方法从多种致牛腹泻和呼吸系统疾病的病原中只检测到BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3;同时检测到的BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3的最低检出量分别为1.0×101,1.0×102,1.0×101 copies/μL,而普通RT-PCR方法的最低检出量分别为1.0×102,1.0×105,1.0×103 copies/μL;组内变异系数和组间变异系数均小于5.0%。应用该方法从采集的68份临床样品中检出17份BVDV-1阳性样品,而普通RT-PCR只检测出12份BVDV-1阳性样品。说明试验建立的BVDV基因分型三重实时荧光定量RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高和稳定性好等优点,可用于BVDV的3种基因型的快速鉴别。

• 单位
  内蒙古农业大学