H9N2禽流感病毒纳米抗体酵母双杂交文库的构建

作者：张诚; 郭承意; 周雷; 仝丽娜; 文英; 李增魁; 张红见; 贺晓龙; 贾跃宁; 康明; 高小龙^*

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2021, 49(01): 10-16.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2021.01.002

• H9N2禽流感病毒
• 纳米抗体
• 酵母双杂交

【目的】构建H9N2禽流感病毒(AIV)纳米抗体(Nbs)酵母双杂交文库,为后期筛选H9N2 AIV Nbs奠定基础。【方法】以H9亚型禽流感疫苗(F株)免疫双峰驼,当血凝抑制(HI)抗体滴度大于1∶24时,颈静脉采集血液,分离淋巴细胞并提取淋巴细胞总RNA,用反转录试剂盒合成第一链cDNA,再以此为模板,通过巢式PCR扩增Nbs基因片段。将Nbs基因与pGADT7-Rec载体共转至Y187酵母感受态细胞,转化产物涂布SD/-Leu平板,30℃倒置培养约4 d,收集平板上的全部菌落,构建H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库,并对文库库容、滴度、重组效率和多样性进行鉴定。【结果】经H9亚型禽流感疫苗连续免疫4次后,双峰驼HI抗体滴度可达1∶29;通过巢式PCR成功扩增出400 bp的Nbs基因。对构建的H9N2AIV Nbs酵母双杂交文库的鉴定表明,其库容为2.4×108,滴度为4.2×109 CFU/mL,插入重组率为95.6%;随机挑取10个克隆测序,结果显示均符合Nbs序列特征,且为独立克隆,表明文库多样性良好。【结论】成功构建了H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库,且文库各项指标均达到了要求。

• 单位
  青海大学农牧学院