暗色刺参的实时荧光PCR鉴定

作者：吴姗; 虞惠贞; 沈旭芳; 孙超; 张荃; 陈哲; 尹文秀; 张明哲; 张晓峰^*

来源：中国海洋大学学报(自然科学版), 2022, 52(12): 33-43.

DOI：10.16441/j.cnki.hdxb.20210299

• 暗色刺参
• 物种鉴定
• 实时荧光PCR
• 濒危物种

暗色刺参(Isostichopus fuscus)已被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)目录。为精确辨别和有效保护该物种，作者进行了精准鉴定暗色刺参的实时荧光PCR方法的研究。在GenBank中收集暗色刺参及近似种海参的线粒体序列，使用海参的线粒体基因中细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(Cytochrome oxidase subunitⅠgene, COⅠ)进行实时荧光PCR中引物和探针的设计。根据收集到的17种海参的25条COⅠ序列，设计了2组具有暗色刺参特异性的引物探针组合I-fu-1和I-fu-2;同时根据暗色刺参实物测序得到的COⅠ序列，设计了引物探针I-fu-3～I-fu-6。实时荧光PCR检测结果显示：I-fu-1、I-fu-3、I-fu-4、I-fu-6仅在目标物种中检测到阳性，I-fu-2和I-fu-5则在墨西哥刺参(Isostichopus badionotus)中也检测到阳性；对纯暗色刺参样本的灵敏度(指在一次荧光PCR反应中能够检测到暗色刺参的最低浓度)检测显示，I-fu-4优于I-fu-1、I-fu-3和I-fu-6,可达到0.000 8 ng/μL,因此认为I-fu-4是最佳的引物探针组合。利用I-fu-4对混合物中暗色刺参进行检测，在同属近似种墨西哥刺参含量高达99.9%,暗色刺参含量低至0.05%的混合样品中，暗色刺参的实时荧光PCR检测也显示了强阳性结果。本研究建立的鉴定方法具有高特异性和灵敏度的特性，有助于快速、精准地鉴定暗色刺参。