科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨miR-20a-5p对神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)细胞系SH-SY5Y增殖、侵袭和迁移的影响及其调控机制。方法将miR-20a-5p过表达及抑制基因分别转染至SH-SY5Y细胞, 根据实验需要分为miR-20a-5p过表达组、NC过表达组、miR-20a-5p抑制组、NC抑制组, 通过体外实验研究miR-20a-5p对NB细胞系SH-SY5Y的增殖、侵袭和迁移的影响。根据生物信息学预测软件初步预测NFKBIB(IκB β)可能为miR-20a-5p的下游靶基因, 运用双荧光素酶报告实验、定量反转录PCR (qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)验证miR-20a-5p靶向调控NFKBIB基因。通过细胞集落形成实验、CCK-8实验、细胞侵袭实验、细胞划痕实验、流式细胞术研究miR-20a-5p在SH-SY5Y细胞中增殖、侵袭和迁移的生物学功能。在mRNA水平上, 运用qRT-PCR检测每组细胞中NFKBIB mRNA的表达量;用Western blot检测在每组细胞中NFKBIB、NF-κB蛋白的表达量。结果细胞集落形成实验显示miR-20a-5p过表达组细胞集落形成数为(146±16)个, 较NC过表达组(39±1)个显著增高, 差异有统计学意义(P<0. 01)。CCK-8实验结果显示miR-20a-5p过表达组较NC过表达组显著促进SH-SY5Y细胞增殖。细胞侵袭实验结果显示miR-20a-5p过表达组细胞侵袭数量为(117±5)个, 较NC过表达组(55±2)个显著增多, 差异有统计学意义(P<0. 001)。细胞划痕实验结果显示miR-20a-5p过表达组细胞愈合率为(0. 56±0. 05)%, NC过表组细胞愈合率为(0. 40±0. 08)%, 差异有统计学意义(P<0. 05)。流式细胞术实验结果显示抑制miR-20a-5p后, SH-SY5Y细胞早期凋亡的细胞数较NC抑制组增多。抑制miR-20a-5p的表达后, 上述实验结果与过表达miR-20a-5p时相反, 差异均有统计学意义(P<0. 05)。过表达miR-20a-5p后, qRT-PCR结果显示miR-20a-5p过表达组NFKBIB mRNA表达含量为(0. 36±0. 24), 较NC过表达组(1. 00)显著降低;Western blot结果显示miR-20a-5p过表达组NFKBIB表达量为(1. 15±0. 30), 较NC过表达组的表达量(1. 92±0. 31)显著降低;NF-κB表达量为(4. 17±0. 45), 较NC过表达组的表达量(1. 64±0. 39)显著增加, 差异均有统计学意义(P< 0. 05)。结论 miR-20a-5p促进NB细胞系SH-SY5Y的增殖、侵袭和迁移能力, 可能是通过抑制NFKBIB的表达来激活NF-κB通路, 或可作为促进NB细胞增殖、侵袭和迁移的潜在干预靶点。
- 单位
