人胆固醇酯水解酶基因慢病毒载体构建及鉴定

作者：关宁; 罗俊生; 霍晓川; 顾立学; 王瑞; 张兴海; 冯旭

来源：军医进修学院学报, 2012, (12): 1303-1305.

• 胆固醇酯水解酶
• 慢病毒表达载体
• 病毒包装

目的构建含有人胆固醇酯水解酶(hCEH)基因的慢病毒表达载体pLenti6.3-hCEH-IRES-EGFP,为hCEH基因治疗缺血性脑卒奠定基础。方法应用聚合酶链反应方法扩增目的片段,在目的基因进行上、下游分别加上Pac I和Asc I两个酶切位点,经双酶切后,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选获得重组质粒。将目的基因片段和pLenti6.3-IRES-EGFP载体连接,获得慢病毒表达载体pLenti6.3-hCEH-IRES-EGFP,并进行测序。抽提慢病毒载体,转染293T细胞,包装病毒,测定病毒滴度。结果目的基因与慢病毒表达载体pLenti6.3-IRES-EGFP连接,慢病毒表达载...

• 单位
  辽宁医学院附属第一医院