非洲猪瘟病毒RNA聚合酶亚基D205R基因生物信息学分析及多克隆抗体制备

作者：王国超; 赵亚茹; 张忠辉; 张玉龙; 白鸽; 耿抒贤; 樊洁; 杨吉飞; 关贵全; 殷宏; 罗建勋^*; 牛庆丽^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(05): 2042-2049.

• 非洲猪瘟病毒
• pD205R蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)pD205R蛋白参与病毒基因的转录，属于ASFV RNA聚合酶，且与真核生物RNA聚合酶II RPB5亚基相似，为深入了解pD205R结构，功能及病毒与宿主之间的作用机制。利用DNAStar、MEGA7.0对GenBank中公布的不同毒株的ASFVD205R基因序列进行分析，利用ExPASy、GOR4、AlphaFold软件对该蛋白的理化性质及结构预测进行分析，并对其原核表达和制备抗pD205R蛋白多克隆抗体。结果显示：在不同基因型间D205R基因高度保守；利用ExPASy在线软件预测pD205R蛋白理化性质其分子式为C1088H1712N278O295S8,属亲水性蛋白，稳定性差；二级结构及三级结构预测显示，α螺旋是其主要结构形式，占比为35.12%;同时以ASFV-CN/SC/2019毒株基因组为模板，构建原核表达质粒pET-28a-D205R并转入Rosetta (DE3)感受态细胞，经IPTG诱导重组蛋白成功表达，大小为23.3 ku。获得的蛋白经镍柱亲和层析纯化，Western blot鉴定可与ASFV阳性血清发生特异性反应。免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体效价达到1∶51 200,Western blot和IFA结果显示制备的多克隆抗体够特异性的识别ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的天然pD205R蛋白，为进一步研究D205R基因的功能及其在宿主与病毒互作中的作用奠定了基础。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 渭南市动物疫病预防控制中心