m6A甲基化修饰调控结直肠癌细胞中PD-L1表达

作者：余诗俊; 栗丽; 窦宁; 高勇^*

来源：兰州大学学报(医学版), 2021, 47(01): 47-58.

DOI：10.13885/j.issn.1000-2812.2021.01.008

• 程序性死亡配体-1
• N6-腺苷酸甲基化
• 结直肠癌
• 免疫治疗

目的检测程序性死亡配体-1(PD-L1)mRNA在结直肠癌细胞中是否存在m6A甲基化修饰以及m6A对PD-L1表达的影响,为结直肠癌的免疫治疗提供新的理论依据。方法利用实时荧光定量聚合酶链式反应技术(qPCR)及蛋白质印迹法检测m6A相关蛋白表达变化对PD-L1mRNA和蛋白表达的影响,通过双荧光素酶报告基因实验验证YTHDF2对PD-L1mRNA的调控作用,采用甲基化RNA免疫共沉淀结合qPCR技术(MeRIP-qPCR)确认YTHDF2对PD-L1m6A水平的影响,通过qPCR比较PD-L1和YTHDF2在结直肠癌组织中表达的相关性。结果 qPCR和蛋白质印迹检测结果显示m6A阅读蛋白YTHDF2可负向调控PD-L1mRNA和蛋白表达水平,双荧光素酶实验结果说明YTHDF2可识别并作用于PD-L1基因上的潜在m6A修饰位点,MeRIP-qPCR分析发现YTHDF2可以抑制PD-L1mRNA的m6A水平,qPCR进一步发现YTHDF2与PD-L1在癌组织中的表达量呈负相关关系。结论 PD-L1在结直肠癌细胞中存在m6A修饰,且YTHDF2可抑制其在结直肠癌细胞中的m6A水平及表达量。

• 单位
  同济大学附属东方医院