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摘要
目的建立乳鹿分子身份证快速鉴定方法,研发出乳鹿分子身份证快速检测试剂盒。方法以乳鹿mtDNA Cytb作为靶基因,设计乳鹿特异性引物(扩增片段长度为46 bp),确定乳鹿分子身份证;应用分子克隆及测序技术,克隆乳鹿DNA检测的标准品并验证分子身份证序列的正确性;开发出乳鹿分子身份证快速检测试剂盒,并对试剂的特异性、重现性、稳定性及灵敏度进行考察。结果利用乳鹿mtDNA Cytb基因设计小片段引物,56℃时特异性最强,乳鹿对照药材及乳鹿正品均在46 bp处出现一条特异性扩增条带,而阴性及空白对照均未出现扩增条带,确定了乳鹿的分子身份证;克隆测序后的乳鹿DNA序列与乳鹿mtDNA特异指纹区段序列同源性100%,同时验证了乳鹿分子身份证序列的正确性。自主研发的试剂特异性、重现性、稳定性良好,模板DNA最低检出量为5 pg·μL-1。结论本实验建立的乳鹿分子身份证快速鉴定方法特异、准确、可靠,研制的试剂盒操作简便、结果稳定,适用于DNA降解严重的材料。
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单位北华大学; 基础医学院
