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摘要
为建立一种能够快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的普通PCR方法，本研究分别以ASFV B646L和F778R基因为靶序列设计了两对特异性引物，建立ASFV B646L和F778R双基因普通PCR方法，并对其特异性、灵敏性及重复性进行检测。结果显示：该PCR体系(25.0μL体系)的最优组合为Pfu酶0.2μL、10×Reaction Buffer 2.5μL、2.5 mmol/L d NTP Mixture 2.5μL、B646L上下游引物各1.5μL、F778R上下游引物各0.5μL、DNA模板1.0μL；退火温度为57℃、退火时间为30 s、72℃延伸2.5 min,30个循环。该方法仅针对ASFV B646L和F778R基因进行特异性扩增，无交叉反应。同时对B646L和F778R阳性质粒的最低检测下限分别为7.2×107 copies/μL、1.5×106 copies/μL，试验重复性良好。本研究对于提高ASFV临床诊断的准确性、特异性和高效性具有重要价值，为其快速检测提供了可靠的技术支撑。
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单位湖南省畜牧兽医研究所; 湖南农业大学
