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摘要
目的 探究重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂（rSj-Cys）对急性肝衰竭所致急性肾损伤的保护作用及其机制，为急性肾损伤临床治疗提供科学依据。方法 将24只雄性C57BL/6J小鼠（6～8周龄）随机分为正常对照组、rSj-Cys对照组、脂多糖（LPS）-D-氨基半乳糖（D-GaIN）模型组和LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组，每组6只小鼠。LPS/D-GaIN组和LPS/D-GaIN+rSj-Cys组小鼠均腹腔注射LPS(10μg/kg)和D-GaIN(700 mg/kg)造模；造模后30 min,LPS/D-GaIN+rSj-Cys组及rSj-Cys对照组小鼠均腹腔注射rSj-Cys(1.25 mg/kg)，正常对照组小鼠注射等体积PBS。造模6 h后，处死各组小鼠，收集小鼠血清及肾组织，检测血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）含量。苏木精-伊红（HE）染色观察各组小鼠肾脏组织病理形态，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清炎性因子肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-6表达，采用免疫组化法检测肾组织炎性因子和焦亡相关蛋白表达水平，采用免疫印迹法检测肾组织焦亡相关蛋白和核因子-κB(NF-κB)信号通路蛋白表达水平。结果 HE染色显示，正常对照组和rSj-Cys对照组小鼠肾脏结构未见明显异常，LPS/D-GaIN组小鼠肾组织出现肾小管损伤，而LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组小鼠肾小管损伤减轻。4组小鼠血清Cr(F=46.33,P <0.001)、BUN(F=128.60,P <0.001)、TNF-α(F=102.00,P <0.001)和IL-6水平（F=202.10,P <0.001）差异均有统计学意义，LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组小鼠血清Cr[(85.35±32.05)μmol/L]、BUN[(11.90±2.76)mmol/L]、TNF-α[(158.27±15.83)pg/mL]和IL-6水平[（56.72±4.37）pg/mL]均低于LPS/D-GaIN组（P均<0.01）。4组小鼠肾组织TNF-α(F=24.16,P <0.001)和IL-10表达水平（F=15.07,P <0.01）差异均有统计学意义；LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组肾组织TNF-α表达水平[（106.50±16.57）%]低于LPS/D-GaIN组（P <0.01）,IL-10表达水平[（91.83±5.23）%]高于LPS/D-GaIN组（P <0.01）。免疫印迹法及免疫组化染色结果均表明，各组小鼠肾脏焦亡相关蛋白NLRP3(F=24.57、30.72,P均<0.001)、IL-1β(F=19.24、22.59,P均<0.001)和IL-18表达水平（F=16.60、19.30,P均<0.001）差异均有统计学意义，LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组小鼠NLRP3、IL-1β和IL-18蛋白表达水平均低于LPS/D-GaIN组（P均<0.05）。各组小鼠肾脏NF-κB信号通路相关蛋白p-NF-κB p-p65/NF-κB p65(F=71.88,P <0.001)、TLR4(F=45.49,P <0.001)和p-IκB/IκB表达水平（F=60.87,P <0.001）差异均有统计学意义，LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组小鼠肾脏NF-κB信号通路相关蛋白表达水平均低于LPS/D-GaIN组（P均<0.01）。结论 rSj-Cys可通过抑制炎症和焦亡下调NF-κB通路，从而发挥对急性肝衰竭所致的急性肾损伤的保护作用。
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