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摘要
目的探讨放射性核素131I标记的程序性死亡受体配体1单克隆抗体(PD-L1 McAb)的物理性质及其在人乳腺癌荷瘤小鼠模型中进行分子成像的可行性。方法采用氯胺T法以放射性核素131I标记PD-L1 McAb, 采用纸层析法测定131I标记PD-L1 McAb的标记率, 并计算放射性比活度;标记产物131I-PD-L1 McAb采用葡聚糖凝胶G-25层析柱分离纯化, 采用纸层析法测定131I-PD-L1 McAb的放射性化学纯度, 以及131I-PD-L1 McAb在生理盐水和健康成人血浆中的稳定性。培养人乳腺癌PD-L1阳性细胞株MDA-MB-231细胞, 随机分为总结合实验(TB)组和非特异性结合实验(NSB)组, 每组又分为6个亚组, 各亚组在PH 7.4的磷酸盐缓冲液中分别加入不同体积的131I-PD-L1 McAb溶液和PD-L1 McAb溶液, 配制总量500 μL, 使用GC-300型免疫γ-计数器测量各组细胞中131I-PD-L1 McAb的每分钟计数(cpm)值。根据TB组与NSB组各亚组之间cpm值的差值, 使用Scatchard作图分析方法计算131I-PD-L1 McAb的平衡解离常数KD值, 评估131I-PD-L1 McAb与MDA-MB-231细胞亲和力。取裸鼠3只, 于右前肢前臂皮下接种MDA-MB-231细胞悬液制备人乳腺癌荷瘤小鼠模型, 观察接种部位成瘤情况并计算肿瘤体积。裸鼠肿瘤接种后第15天按200 MBq/kg尾静脉注射131I-PD-L1 McAb溶液, 分别于注射后5 min、30 min、60 min、24 h、48 h、72 h使用小动物活体成像仪进行放射性核素成像检查, 观察131I-PD-L1 McAb在荷瘤鼠体内浓聚情况;在小动物活体成像检查图像上选择肿瘤部位、对侧前肢相应部位为感兴趣区, 计算相应的放射性计数靶(T)值和放射性计数非靶(NT)值, 比较不同时间点肿瘤部位与非肿瘤部位的放射性活度比值(T/NT)的变化情况。结果 131I标记PD-L1 McAb的标记率为80.10%～82.20%(81.07%±1.06%), 标记产物131I-PD-L1 McAb的放射性比活度为(2.78±0.23)MBq/μg, 放射性化学纯度为99.10%～99.60%(99.37%±0.25%)。131I-PD-L1 McAb在生理盐水与人新鲜血浆溶液中6 h内放射性化学纯度均大于80%。131I-PD-L1 McAb与MDA-MB-231细胞KD值为60～64(62±2)nmol/L。3只裸鼠均成功建立乳腺癌荷瘤小鼠模型, 接种乳腺癌MDA-MB-231细胞后第6天触及肿块, 第15天测量肿瘤体积为0.92～1.12(1.00±0.11)cm3。尾静脉注射131I-PD-L1 McAb后, 不同时间点小动物活体放射性核素成像显示, 131I-PD-L1 McAb早期主要在荷瘤鼠腹部浓聚, 24 h时荷瘤鼠右前肢肿瘤部位开始显影, 48 h时肿瘤显影最为清晰, 72 h时肿瘤部位显影开始模糊。不同时间点放射性计数T/NT值随着注射时间的延长逐渐增加, 48 h时T/NT值最大(6.66±1.10), 72 h时开始下降, 不同时间点T/NT值比较, 差异有统计学意义(F=38.04, P=0.011)。结论放射性核素131I标记PD-L1 McAb, 具有较高的标记率。标记产物131I-PD-L1 McAb具有较高的放射性化学纯度及适宜的放射性比活度, 在体外有良好的稳定性, 且与MDA-MB-231细胞亲和力较高, 可用于人乳腺癌荷瘤小鼠模型的分子成像研究。
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