磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3对肝细胞癌细胞生物学行为的影响

作者：师文楷; 张予川; 赵永福^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2022, 36(08): 769-773.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2022.08.004

• 肝细胞癌
• 磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3
• FoxO4
• 增殖
• 侵袭
• 迁移
• SMMC-7721细胞

目的 探讨磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3(phosphofructokinase-2/fructose-2, 6-bisphosphatase 3, PFKFB3)表达对肝细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及调控机制。方法 对数生长期SMMC-7721细胞分为PFKFB3敲低组(转染shRNA-PFKFB3慢病毒)和对照组(转染shRNA-NC慢病毒)。转染后采用实时荧光定量PCR法检测细胞PFKFB3 mRNA相对表达量，采用Western blot法检测细胞PFKFB3蛋白相对表达量，采用CCK-8实验检测0、24、48、72 h细胞增殖吸光度(optical density, OD)值，采用Transwell小室实验检测侵袭细胞数和迁移细胞数；采用基因芯片技术检测并分析2组细胞基因表达谱差异，GO和KEGG富集分析差异表达基因参与的生物学过程及信号通路；采用实时荧光定量PCR法检测受PFKFB3敲低影响较大的FoxO信号通路相关基因FoxO1、FoxO4、CCNB1、CCND1、CDKN1B、BCL6、GADD45A mRNA相对表达量，筛选出表达差异最明显的基因FoxO4,采用免疫共沉淀法验证PFKFB3与FoxO4的相互作用。结果 PFKFB3敲低组PFKFB3 mRNA(0.23±0.02)及蛋白(0.40±0.03)相对表达量均低于对照组(1.01±0.07、1.12±0.06)(t=34.862,P<0.001;t=18.591,P<0.001)。PFKFB3敲低组转染后培养24、48、72 h时细胞增殖OD值(1.11±0.09、1.74±0.03、3.05±0.09)均低于对照组(1.55±0.02、2.44±0.06、4.00±0.00)(P<0.05),0 h时细胞增殖OD值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。PFKFB3敲低组侵袭细胞数[(56.00±6.08)个]、迁移细胞数[(120.67±7.57)个]均少于对照组[(432.00±11.00)、(474.67±6.11)个](t=51.811,P<0.001;t=63.108,P<0.001)。2组共检测出2 178个差异表达基因(1 473个上调基因和705个下调基因),差异表达基因主要参与细胞周期、DNA转录调控的生物学过程，FoxO信号通路受PFKFB3敲低的影响较大。PFKFB3敲低组细胞FoxO1、FoxO4、GADD45A mRNA相对表达量均高于对照组(P<0.05),CCNB1、CCND1、CDKN1B、BCL6 mRNA相对表达量均低于对照组(P<0.05),其中FoxO4表达与对照组差异最明显。PFKFB3与FoxO4存在相互作用。结论 下调PFKFB3表达可抑制肝细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移，可能与PFKFB3调控FoxO4信号通路有关。

• 单位
  河南省人民医院; 郑州大学; 郑州大学第一附属医院