circ-SFMBT2调节miR-491-5p/HOXA9轴对急性髓系白血病细胞增殖、迁移和侵袭的影响

作者：李妍; 史利欢^*; 谢昕; 范朋凯

来源：中国实验血液学杂志, 2023, 31(06): 1599-1607.

DOI：10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2023.06.001

• 急性髓系白血病
• circ-SFMBT2
• miR-491-5p
• 同源盒基因A9
• 增殖
• 侵袭
• 迁移

目的：探讨circ-SFMBT2对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法：收集2015年4月至2017年4月在河南省儿童医院确诊的35例儿童AML患者和35名健康对照者的骨髓样本以及人骨髓基质细胞系(HS-5)和AML细胞系(HL-60、THP-1、U-937和Kasumi-1),RT-q PCR和Western blot检测骨髓样本和细胞中circ-SFMBT2、miR-491-5p、同源盒基因A9(HOXA9)的表达，采用Pearson法分析AML患儿骨髓样本中circ-SFMBT2、miR-491-5p和HOXA9 mRNA表达水平的相关性。体外培养HL-60细胞并分为对照、si-NC、sicirc-SFMBT2、si-circ-SFMBT2+anti-NC和si-circ-SFMBT2+anti-miR-491-5p共5组，用LipofectamineTM3000将si-NC、si-circ-SFMBT2、anti-NC、miR-491-5p inhibitor转染至HL-60细胞；采用RT-q PCR和Western blot检测各组细胞中circ-SFMBT2、miR-491-5p、HOXA9的表达水平；CCK-8法分别在转染24、48和72 h检测各组HL-60细胞增殖活性；流式细胞术检测细胞凋亡率；Transwell小室实验检测细胞的迁移、侵袭能力；通过双荧光素酶报告基因、RNA pull-down和RNA结合蛋白免疫沉淀实验验证AML细胞中circ-SFMBT2、miR-491-5p和HOXA9的调控作用。结果：AML患儿骨髓样本和细胞系(HL-60、THP-1、U-937和Kasumi-1)中circ-SFMBT2、HOXA9 mRNA表达水平升高(P<0.001)，而miR-491-5p表达水平明显降低(P<0.001);Pearson相关分析显示，AML患儿骨髓样本中circ-SFMBT2与miR-491-5p的表达水平呈负相关(r=-0.905),miR-491-5p与HOXA9 mRNA的表达水平呈负相关(r=-0.930),HOXA9mRNA与circ-SFMBT2的表达水平呈正相关(r=0.911)，且circ-SFMBT2高表达的AML患儿的总生存率较低表达患儿显著降低(P<0.05)。circ-SFMBT2的沉默可显著上调miR-491-5p表达，降低HOXA9表达，抑制AML细胞增殖、迁移和侵袭，促进细胞凋亡(P<0.05)；下调miR-491-5p表达可显著减弱circ-SFMBT2沉默对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因、RNA pull-down和RNA结合蛋白免疫沉淀实验证实circ-SFMBT2可以靶向miR-491-5p并在AML中负调控miR-491-5p的表达，HOXA9是miR-491-5p的靶标。结论：circ-SFMBT2的沉默可能通过调节miR-491-5p/HOXA9轴来抑制AML细胞的增殖、迁移与侵袭。

• 单位
  郑州儿童医院