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摘要
目的通过改良的重组腺病毒介导方法研究Livin基因与K562细胞增殖、凋亡及耐药的关系。方法用基因工程技术将靶向Livin siRNA片段克隆至穿梭质粒pSES-HUS中,然后与骨架质粒pAdeasy同源重组,将重组成功的质粒用脂质体介导的方法转染HEK293细胞,乒乓感染收获高滴度的重组腺病毒Ad5-Livin siRNA,并将其感染K562细胞,采用Real-time PCR、Western blot检测Livin基因的干扰效果,用MTT和流式细胞仪检测其与K562细胞增殖、凋亡及多药耐药的关系。结果成功构建重组腺病毒Ad5-Livin siRNA,并感染K562细胞,在mRNA和蛋白2个水平均抑制Livin的表达。证实通过重组腺病毒沉默Livin基因,可抑制K562细胞增殖,促进凋亡,增加其对阿霉素、长春新碱和依托泊苷的敏感性。结论用重组腺病毒介导的方法抑制K562细胞中Livin基因的表达,可增加K562细胞的凋亡及对抗癌药物的敏感性。Livin可能成为治疗白血病新的分子靶点。
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单位重庆医科大学附属儿童医院
