成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒的构建、纯化及表达

作者：郭国宁周跃张正丰

来源：免疫学杂志, 2005, (02): 150-154.

• 核心结合因子
• 腺病毒
• 基因治疗 Core binding factor
• Adenovirus
• Gene therapy

目的　构建成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒载体,以期用于骨缺损、脊柱融合的体内、外研究。方法　以含有全长cDNA的pCMVβCbfa1为模板,PCR扩增Cbfa1,T A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdTrack -CMV上,在BJ5 183细菌内和pAdEasy 1同源重组,筛选阳性克隆,酶切、PCR及测序鉴定,线性化后脂质体法转染2 93T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测,CsCl梯度离心纯化病毒。AdEasy1 Cbfa1感染NIH3T3细胞后Western blotting检测Cbfa1蛋白的表达。结果　测序、酶切及PCR证实Cbfa1基因重...

• 单位
  新桥医院