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摘要
地黄是中国传统的中药材，其活性成分毛蕊花糖苷具有抗肿瘤、降血糖、抗炎等药理作用。为了研究毛蕊花糖苷生物合成途径，本研究基于地黄转录组数据筛选得到1条多酚氧化酶(PPO)候选基因，命名为RgPPO。通过PCR获得该基因全长，对该基因进行生物信息学分析，利用qRT-PCR技术分析RgPPO基因的表达特性，并构建pET-28a-RgPPO原核表达载体，在大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达RgPPO重组蛋白。结果显示，RgPPO基因的cDNA全长为1 752 bp，编码583个氨基酸；生物信息学分析结果显示RgPPO为非跨膜蛋白，无信号肽；该蛋白具有多酚氧化酶典型结构域Tyrosinase、PPO1＿DWL和PPO1＿KFDV；RgPPO与紫花风铃木中的PPO同源性最高，氨基酸一致度为84.55%。qRT-PCR结果显示，RgPPO在嫩叶中表达量高于老叶和根；原核表达载体pET-28a-RgPPO在大肠杆菌中成功表达出RgPPO重组蛋白，但该重组蛋白大部分以包涵体的形式存在。该研究首次克隆得到了地黄多酚氧化酶基因，为进一步分析该基因的功能提供了分子基础。
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