融合表达白细胞介素10与卵清蛋白重组腺病毒口服变应原疫苗的构建及鉴定

作者：马仕坤^*; 关剑; **; 甄宏楠; 谢喜秀

来源：中华临床免疫和变态反应杂志, 2018, 12(03): 263-269.

• 白细胞介素10
• 变应原
• 重组腺病毒
• 口服疫苗

目的构建免疫调节因子白细胞介素(IL)-10与模式变应原卵清蛋白(OVA)融合表达的重组腺病毒载体口服疫苗。方法直接合成鸡IL-10及OVA的DNA序列后,采用重叠PCR法进行连接。连接序列插入穿梭质粒p HBAd-MCMV的多克隆区,获得重组穿梭质粒p Ad IL-10-OVA。经测序鉴定后,p Ad IL-10-OVA与腺病毒骨架质粒p HBAd-BHG共转染293细胞,包装获得重组腺病毒Ad IL-10-OVA原代病毒,将原代病毒在293细胞中扩增到合适滴度。采用ELISA法检测细胞上清液中融合蛋白的表达水平。结果重组穿梭质粒插入目标序列经测序鉴定正确,重组腺病毒载体疫苗r Ad IL-10-OVA在293细胞中成功表达。结论成功构建了融合表达IL-10与OVA的重组腺病毒载体疫苗Ad IL-10-OVA,为后续动物实验验证其对变态反应性疾病的防治效应奠定了基础。

• 单位
  中国科学院过程工程研究所; 中国医学科学院北京协和医学院; 北京协和医院