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摘要
目的 应用反向遗传技术构建以B型流感病毒冷适应株为骨架表达季节性流感病毒H1N1 HA蛋白的嵌合疫苗株。方法 将B型流感病毒冷适应株B/Vienna/1/99的HA片段胞外区替换为H1N1(A/Victoria/2570/2019)的HA蛋白，将重组质粒与骨架株的其余7个质粒共转染293T细胞，拯救H1N1嵌合疫苗株。对重组病毒株进行血凝鉴定、RT-PCR鉴定、电镜鉴定、一步生长曲线绘制以及小鼠安全性评价。结果 成功拯救出H1N1嵌合流感病毒株，命名为rA/B-H1-Vic。经测序鉴定其序列与预期一致，并且在电镜下观察到流感病毒粒子的典型特征。H1N1嵌合流感病毒株血凝效价最高达25,在MDCK细胞上的病毒滴度为104.5 TCID50/mL,在鸡胚中的病毒滴度为108.36EID50/mL。分别以106 EID50和105 EID50剂量鼻腔接种小鼠，其体重与对照组相比无明显下降，小鼠存活率100%,攻毒后第3 d仅在小鼠鼻甲骨和肺脏组织检测到低水平的病毒复制。结论 成功拯救出无毒力的H1N1嵌合疫苗株，为流感病毒新型疫苗的研制提供了新的思路。
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