蜜蜂NADPH-细胞色素P450还原酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学特性分析

作者：武雪龙; 杨晓慧; 汪俊卿; 王瑞明

来源：中国生物工程杂志, 2016, 36(12): 28-35.

DOI：10.13523/j.cb.20161205

• NADPH-细胞色素P450还原酶
• 大肠杆菌
• 异源表达
• 酶学特性

10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)是蜂王浆中的主要脂肪酸成分,具有抗菌、抗癌、延缓衰老等多种生理活性,但目前关于10-HDA生物合成的分子机制还不清楚。通过克隆蜜蜂NADPH-细胞色素P450还原酶(EC 1.6.2.4,NADPH-cytochrome P450 reductase,CPR),在大肠杆菌中异源表达,并对其酶学特性进行分析。结果表明重组菌经IPTG诱导后表达蛋白的分子量与预期一致,为86.29 kDa,Ni-NTA亲和纯化后测得其比活性为77.33(EU of CPR)/μg。酶学性质分析结果表明蜜蜂CPR酶最适温度与pH分别为40℃和8.0,并对一些金属离子及有机溶剂具有不同程度的耐受性。其对底物细胞色素C的动力学参数Km和kcat分别为76μM和268/min。以上研究为探究CPR在10-HDA生物合成途径中的功能奠定理论基础。

• 单位
  生物工程学院; 齐鲁工业大学