胎鼠脊髓神经干细胞的分离培养、鉴定与诱导分化

作者：雷德强; 赵洪洋; 邓兴力; 刘如恩; 张方成

来源：中风与神经疾病杂志, 2008, (03): 265-268.

• 神经干细胞
• 脊髓
• 大鼠
• 细胞培养

目的探讨胚胎大鼠脊髓神经干细胞分离、培养、传代及鉴定的方法。方法显微解剖分离E14d胚胎大鼠脊髓组织,用机械吹打法制成单细胞悬液,接种于含有表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bF-GF)及N2的DMEM/F12(1∶1)无血清培养基中培养,待形成克隆球后进行传代培养。取第3代培养的细胞分别进行Nestin免疫细胞化学鉴定和诱导分化后β-Ⅲ-tubulin、GFAP、CNPase免疫细胞化学鉴定。结果E14d胚胎大鼠脊髓组织细胞培养72h后可形成悬浮生长的神经球,7～10d后即可传代。经传代扩增后得到大量同源的Nestin免疫阳性的细胞克隆球,经诱导分化后大部分细胞分化为GFAP免疫阳性的星形胶质细胞和CNPase免疫阳性的少突胶质细胞,少量细胞分化为β-Ⅲ-tubulin免疫阳性的神经元。结论成功从胚胎大鼠脊髓组织中分离出神经干细胞,为进一步开展脊髓疾病的细胞移植治疗研究奠定了基础。

• 单位
  卫生部中日友好医院; 昆明医学院第一附属医院; 协和医院; 华中科技大学