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摘要
目的 探讨金银花总皂苷对噪声暴露后大鼠分泌性中耳炎的治疗作用及耳蜗Toll样受体4(toll-like receptors-4,TLR-4)-NLR家族Pyrin域包含3(NLR family pyrin domain containing 3,NLRP3)信号通路的影响。方法 50只Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、金银花总皂苷低、中、高剂量组，除正常对照组外，其余各组大鼠在有机玻璃盒中连续15天每天暴露在强度为100 dB声压级（sound pressure level,SPL）的10 kHz倍频程噪声中2 h建立噪声暴露后分泌性中耳炎模型成功后，各药物组给予相应药物干预，正常对照组及模型对照组给予等体积的生理盐水，治疗周期为2周。治疗结束后，测定大鼠听性脑干反应（auditory brainstem response,ABR）阈值水平，硝酸银染色观察大鼠耳蜗基底膜显微结构，电镜检测大鼠耳蜗病理改变，实时荧光逆转录法（real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）法及蛋白印迹法检测耳蜗组织TLR4、NLRP3 mRNA蛋白水平，酶联免疫吸附法（ELISA）法检测耳蜗组织基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。结果正常对照组耳蜗内外毛细胞结构正常；模型对照组耳蜗内、外毛细胞结构破坏严重（倒置、缺失），排列紊乱，有大面积崩坏；纤毛上皮肿胀，纤毛排列紊乱，部分脱落，中耳黏膜增厚，炎症细胞浸润。经金银花总皂苷干预治疗后，各组大鼠耳蜗内外毛细胞破坏程度明显改善。正常对照组耳蜗毛细胞结构正常，模型对照组耳蜗内、外毛细胞排列紊乱，与螺旋神经节细胞周围突结合出现裂隙；经金银花总皂苷干预治疗后，耳蜗内、外毛细胞排列趋于正常，与螺旋神经节细胞周围突结合处仍然有裂隙，但裂隙较小。模型对照组ABR阈值水平、耳蜗组织TLR4[(0.73±0.12)vs(4.29±0.74),(0.24±0.06)vs(1.06±0.17)/GAPDH]、NLRP3[(0.84±0.14)vs(3.88±0.63),(0.30±0.05)vs(1.12±0.18)/GAPDH)]mRNA蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP水平高于正常对照组（P<0.05）；金银花总皂苷低、中、高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织TLR4[(4.29±0.74)vs(3.18±0.50)、（2.34±0.34）、（1.52±0.24）,(1.06±0.17)vs(0.90±0.15)、（0.59±0.10）、（0.40±0.06）/GAPDH）]、NLRP3[(3.88±0.63)vs(3.02±0.48)、（2.18±0.37）、（1.46±0.23）,(1.12±0.18)vs(0.83±0.13)、（0.54±0.09）、（0.36±0.06）/GAPDH]mRNA蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP水平低于模型对照组（P<0.05）；且金银花总皂苷中、高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织TLR4[(3.18±0.50)vs(2.34±0.34)、（1.52±0.24）,(0.90±0.15)vs(0.59±0.10)、（0.40±0.06）/GAPDH]、NLRP3[(3.02±0.48)vs(2.18±0.37)、（1.46±0.23）,(0.83±0.13)vs(0.54±0.09)、（0.36±0.06）/GAPDH]mRNA蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP水平低于金银花总皂苷低剂量组（P<0.01），金银花总皂苷高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织TLR4[(2.34±0.34)vs(1.52±0.24),(0.59±0.10)vs(0.40±0.06)/GAPDH]、NLRP3[(2.18±0.37)vs(1.46±0.23),(0.54±0.09)vs(0.36±0.06)/GAPDH]mRNA蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP水平低于金银花总皂苷中剂量组（P<0.01），剂量-效应关系明显（P<0.01）。结论 金银花总皂苷对噪声暴露后大鼠分泌性中耳炎具有明显的治疗作用，其机制可能为金银花总皂苷抑制炎症TLR-4-NLRP3通路的激活有关。
