马蔺ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作者：王育青; 王晓晶; 王建光

来源：中国草地学报, 2010, 32(02): 80-85.

• 马蔺
• 均匀设计
• ISSR-PCR Iris lactea
• Uniform design
• ISSR-PCR

以内蒙古呼和浩特市近郊野生马蔺DNA为模板,采用均匀设计,通过5因素5水平和5因素3水平两轮均匀优化试验,对影响ISSR-PCR扩增结果的一些因素(Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶和模板DNA浓度等)进行优化筛选,建立了适合马蔺的最佳ISSR-PCR反映体系:在25μl反应体系中,包括2.5μl 10×PCR Buffer、2.0mmol/L Mg2+、2.5μmol/L dNTP、1μmol/L引物1、.5U TaqDNA聚合酶、50ng模板DNA。在此基础上对扩增程序中的循环次数、退火温度进行筛选,获得的扩增程序为:94℃预变性3min;然后进行40个循环(94℃变性45s,5...

• 单位
  中国农业科学院草原研究所; 中国农业科学院研究生院; 内蒙古农业大学; 农业部