畜禽养殖粪污中典型致病菌的三重微滴式数字PCR定量检测方法的建立

作者：程深伟; 张克强; 梁军锋; 刘福元; 郜兴亮; 杜连柱^*

来源：生物技术通报, 2022, 38(09): 271-280.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2022-0944

• 养殖粪污
• 沙门氏菌
• 大肠埃希氏菌
• 金黄色葡萄球菌
• 三重微滴式数字PCR

为精准、快速检测畜禽养殖粪污中典型致病微生物，减少人畜共患病的传播风险，以金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌(O157：H7)和肠炎沙门氏菌3种常见致病菌为研究对象，通过筛选其特异性引物与探针、优化反应系统，建立起快速、稳定的多重微滴式数字PCR(droplet digital PCR，ddPCR)反应体系。通过检测不同菌株验证该体系的特异性，并确定畜禽养殖废弃物致病菌的检出限，开发出多重微滴数字PCR快速检测方法。研究结果表明，各对引物探针对目标菌株均能扩增，ddPCR体系内未出现交叉反应，检测肠炎沙门氏菌的绝对定量检测低限为0.68 copies/μL；检测金黄色葡萄球菌的绝对定量检测低限为0.79 copies/μL；检测大肠埃希氏菌的绝对定量检测低限为1.02 copies/μL。研究建立的方法可实现对畜禽养殖粪污中3种典型致病菌的高效率、高精度的检测。

• 单位
  新疆农垦科学院畜牧兽医研究所