自噬激活剂雷帕霉素对A2E诱导视网膜色素上皮细胞自噬调节的影响

作者：陈云珍; 张晶晶^*

来源：眼科新进展, 2022, 42(12): 942-946.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2022.0193

• N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺
• 雷帕霉素
• 视网膜色素上皮细胞
• 自噬
• 年龄相关性黄斑变性

目的 探讨自噬激活剂雷帕霉素对N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺(A2E)诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞自噬调节的影响。方法 取人RPE细胞(ARPE-19细胞系)进行培养。将细胞分为4组，其中，对照组：使用DMEM-F12完全培养基孵育ARPE-19细胞；A2E组：使用含20μmol·L-1 A2E的DMEM-F12完全培养基孵育ARPE-19细胞；雷帕霉素组：使用含100 nmol·L-1雷帕霉素的DMEM-F12完全培养基预处理细胞1 h后，再用DMEM-F12完全培养基孵育ARPE-19细胞；雷帕霉素联合A2E组：使用100 nmol·L-1雷帕霉素预处理细胞1 h后，再用含20μmol·L-1 A2E的DMEM-F12完全培养基孵育ARPE-19细胞。使用CCK-8法检测各组细胞增殖情况，Procarta细胞因子分析试剂盒检测各组细胞培养上清液中细胞因子表达情况。透射电镜观察各组细胞超微结构，Western blot法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1和P62的表达，免疫荧光染色法检测各组细胞自噬标志物LC3蛋白的表达。结果 与对照组相比，A2E组细胞生存率显著下降(P<0.001),而雷帕霉素联合A2E组细胞生存率得到了部分恢复，与A2E组相比差异有统计学意义(P<0.01)。与A2E组相比，雷帕霉素联合A2E组中10种细胞因子含量均有所下降(均为P<0.01)。与对照组相比，雷帕霉素组细胞内出现散在自噬囊泡，A2E组细胞内出现较多的自噬囊泡，而雷帕霉素联合A2E组细胞内出现大量聚集的大体积的自噬囊泡。与对照组相比，A2E组中Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P<0.001),P62蛋白相对表达量显著降低(P<0.001);与A2E组相比，雷帕霉素联合A2E组中Beclin-1蛋白相对表达量明显升高(P<0.01),而P62蛋白相对表达量明显降低(P<0.001)。雷帕霉素联合A2E组ARPE-19细胞内LC3蛋白的绿色荧光斑点大量聚集，与A2E组相比荧光强度增加，斑点体积更大，数量也更多。结论 雷帕霉素能够进一步激活A2E诱导的ARPE-19细胞自噬活性，一定程度上降低了A2E对RPE细胞造成的损伤，并抑制了ARPE-19细胞中炎症因子和血管生成因子的分泌。

• 单位
  首都医科大学