藁本内酯对白细胞介素-1β诱导大鼠软骨细胞凋亡的保护作用及其机制

作者：夏韶襁; 王俊文^*; 程文俊; 焦竞; 左伟; 黄玉成; 肖飞

来源：中华实验外科杂志, 2019, 36(09): 1630-1633.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.09.030

• 凋亡
• 藁本内酯
• 软骨细胞
• 抑制凋亡

目的 观察藁本内酯对白细胞介素(IL)-1β诱导大鼠软骨细胞凋亡的保护作用。方法 选取健康2周龄无特定病原体(SPF)级SD大鼠,取膝关节软骨细胞进行分离、培养及鉴定。将终质量浓度为15、25、50、75 μmol/L的藁本内酯加入二代软骨细胞培养板中,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖；将藁本内酯加入合适浓度的IL-1β诱导的软骨细胞与对照组细胞内,流式细胞分析技术检测不同浓度藁本内酯对IL-1β诱导软骨细胞凋亡的影响,并检测细胞早期凋亡比例；通过Hoechst34580细胞核染色技术观察藁本内酯对凋亡软骨细胞核形态改变的影响；通过蛋白质印迹法(Western blot)法检测软骨细胞内半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)等蛋白表达的变化。应用SPSS 20.0软件统计分析,计量资料如灰度值比值等采用t检验,计数资料采用Fish确切概率检验。结果 CCK-8检测结果表明藁本内酯在15～70 μmol/L浓度范围内对软骨细胞的增殖无明显促进作用(P>0.05)。流式细胞检测结果表明25～75 μmol/L终质量浓度的藁本内酯可降低IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,凋亡比例分别为(20.12±2.07)%、(13.79±3.19)%和(7.86±2.14)%(t＝17.260、13.140、6.350,P<0.05),Hoechst34580检测结果表明藁本内酯可降低IL-1β诱导软骨细胞凋亡引起的核改变。Western blot法检测结果表明藁本内酯能降低IL-1β诱导的软骨细胞中Caspase-3、Caspase-9、bax和iNOS的表达水平,以及增高bcl-2/bax比值(P<0.05)。结论 藁本内酯可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,且呈剂量依赖性。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属普爱医院