摘要
目的 观察铁缺乏(ID)对主动脉中层退行性变(AMD)小鼠主动脉壁、人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)骨架结构的影响,探讨其可能机制。方法 (1)ApoE-/-小鼠48只随机分为AMD组、ID组、ID+AMD组和对照组各12只。AMD组皮下泵注血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1μg/(kg·min)连续24 d制备AMD模型,同时饲喂正常铁含量饲料;ID组饲喂低铁含量饲料构建ID模型;ID+AMD组AMD模型制备同AMD组,ID模型制备同ID组;对照组饲喂正常铁含量饲料。造模第4天测量4组小鼠收缩压(SBP);造模第24天处死小鼠,应用血清铁检测试剂盒检测铁含量,采用免疫组织化学SP法检测主动脉转铁蛋白(TF)、转铁蛋白受体1(TFR1)、磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)、细胞分裂周期因子42(Cdc42)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)表达。(2)取对数生长期HASMCs分为AngⅡ组(0.1μmol/L AngⅡ)、ID细胞组(20μmol/L去铁胺)、ID+AngⅡ组(0.1μmol/L AngⅡ+20μmol/L去铁胺)和对照细胞组(正常培养基)。处理48 h取4组细胞,采用Western blot法检测TF、TFR1、p-MLC、Cdc42、Rac1蛋白相对表达量。结果 (1)造模第4天AMD组、ID+AMD组小鼠SBP[(171.17±7.73)、(168.00±3.41)mmHg]高于ID组[(115.00±2.00)mmHg]和对照组[(105.17±10.57)mmHg](P<0.05),对照组与ID组,AMD组与ID+AMD组SBP比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)4组小鼠血清铁含量及主动脉TF、TFR1、p-MLC、Cdc42、Rac1表达量比较差异均有统计学意义(P<0.05)。ID组小鼠血清铁含量[(3.67±1.37)μmol/L]及主动脉TF(3.17±0.75)、p-MLC(3.83±1.17)、Cdc42(4.00±1.27)表达量均低于AMD组[(7.67±1.37)μmol/L、8.50±0.55、8.17±2.23、8.83±1.94]和对照组[(9.83±1.72)μmol/L、10.33±1.86、9.83±1.72、9.67±1.75](P<0.05),TFR1(9.67±1.86)及Rac1(6.17±2.04)表达量均高于AMD组(6.00±1.79、3.83±1.84)和对照组(4.50±1.23、2.50±1.05)(P<0.05);AMD组小鼠血清铁含量及主动脉TF、p-MLC、Cdc42表达量均高于ID+AMD组[(3.17±1.60)μmol/L、2.83±0.75、3.67±1.21、3.83±1.17)(P<0.05)、TFR1、Rac1表达量均低于ID+AMD组(10.33±1.86、8.67±1.97)(P<0.05);AMD组与对照组,ID组与ID+AMD组血清铁含量及主动脉TF、TFR1、p-MLC、Cdc42、Rac1表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)4组细胞TF、TFR1、p-MLC、Cdc42、Rac1蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。ID细胞组TF(0.427±0.014)、p-MLC(0.223±0.002)、Cdc42(0.525±0.006)蛋白相对表达量均低于AngⅡ组(1.264±0.023、0.529±0.004、0.957±0.014)和对照细胞组(1.000±0.007、1.000±0.006、1.000±0.169),TFR1(1.446±0.054)、Rac1(1.417±0.073)蛋白相对表达量均高于AngⅡ组(0.606±0.146、1.163±0.016)和对照细胞组(1.000±0.033、1.000±0.059)(P<0.05);AngⅡ组TF、p-MLC及Cdc42蛋白相对表达量均高于ID+AngⅡ组(0.578±0.027、0.354±0.017、0.644±0.010)(P<0.05),TFR1及Rac1蛋白相对表达量均低于ID+AngⅡ组(1.168±0.037、1.593±0.070)(P<0.05);ID细胞组TF、TFR1、p-MLC、Cdc42、Rac1蛋白相对表达量与ID+AngⅡ组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 泵注AngⅡ可促进小鼠AMD形成,增高血压;ID可进一步破坏AMD小鼠的血管平滑肌细胞骨架结构,加重AMD损伤,其机制可能是通过Cdc42/Rac1通路诱导血管平滑肌细胞骨架结构破坏,促进AMD形成。
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单位武汉大学人民医院