eNOS基因G894T变异对血管内皮细胞产生一氧化氮能力的影响及其意义

作者：郑力文; 王万春; 毛新展; 倪江东; 魏建伟; 陈丁; 李丁; 毛敏之

来源：中国医师杂志, 2019, 21(05): 677-681+687.

• 内皮,血管
• 一氧化氮合酶
• 多态性,单核苷酸
• 股骨头坏死

目的探索血管内皮细胞一氧化氮合成酶(e NOS)基因多态性对其产生一氧化氮能力的影响及其与缺血性股骨头坏死(ANFH)发病机制的相关性。方法分别将含894G和894T的e NOS全长CDS片段亚克隆到慢病毒表达载体,转染到血管内皮细胞(HUVEC),在不同时间点检测细胞培养上清中一氧化氮(NO)和鸟苷酸环化酶(c GMP)的含量;用脂质体介导荧光素酶标记的报告质粒p NF-κB-luc与内参对照质粒pRL-TK共转染经LV-eNOS-894G和LV-eNOS-894T及对照慢病毒(LV-NC)转染的HUVEC细胞,待48 h后Western blot法检测各组HUVEC细胞内核因子-κB(NF-κB)、e NOS的蛋白表达。将上述各组HUVEC细胞分别与人成骨细胞h FOB1. 19共培养,不同时间点检测细胞培养上清中碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)的浓度。结果转染e NOS基因(含894G或894T)全长表达慢病毒的细胞培养上清中NO含量和c GMP的含量明显高于空白对照组和空载体组,且894G组NO和c GMP含量显著高于894T组(P <0. 01);与空白对照组相比,转染了e NOS基因的细胞中NF-κB/p65和e NOS蛋白表达水平显著增多,且894G组显著高于894T组;上述各组HUVEC细胞分别与h FOB1. 19成骨细胞共培养,在同一时间点,转染e NOS基因(含894G或894T)全长表达慢病毒的细胞培养上清中ALP和OCN浓度明显高于空白对照组和空载体组,且894G组的ALP和OCN浓度显著高于894T组。结论 e NOS基因外显子G894T变异通过e NOS-NO通路使血管内皮细胞产生的NO和c GMP下降,影响了NF-κB/p65和e NOS蛋白的表达水平,使骨组织血管供血减少、成骨细胞活性下降,可能是导致股骨头坏死的致病机制之一。

• 单位
  中南大学湘雅二医院