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摘要
为开发木霉天冬氨酸蛋白酶的应用潜能，采用实时聚合酶链式反应技术，从棘孢木霉(Trichoderma asperellum)中克隆蛋白酶基因asp，并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中成功表达，进一步对重组蛋白酶rAsp进行分离纯化，分析其生化特性及对大豆分离蛋白的水解作用。结果显示，asp基因编码的蛋白酶属于天冬氨酸蛋白酶家族，其序列与本家族成员序列相似性最高为47.74%。在三角瓶中诱导表达时，发酵液中rAsp的酶活力为25.8 U/mL。rAsp最适反应pH值和温度分别为2.5和45℃，在pH 2.0～6.0范围和45℃以下具有较强的稳定性。Cu2+和Mn2+具有促进rAsp活性的作用，而Fe3+、十二烷基硫酸钠和胃蛋白酶抑制剂显著抑制rAsp的活性。rAsp对大豆分离蛋白的水解效率较商业化胃蛋白酶高7.7%；同时，降低β-伴大豆球蛋白和球蛋白致敏性的能力分别是胃蛋白酶的1.4倍和1.8倍。因此，rAsp在大豆蛋白加工应用中具有潜在的开发价值。
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