TLR2/4、NOD1/2受体在ETEC感染猪肠道上皮细胞炎性反应中作用的研究

作者：李雪滢; 韩阳春; 黄静; 李霞; 曾聪; 肖乐; 刘峻源; 曾雯玉; 彭远义^*; 王自力^*

来源：中国预防兽医学报, 2022, 44(07): 750-756.

• 产肠毒素大肠杆菌
• 猪肠道上皮细胞
• TLR2、TLR4
• NOD1、NOD2
• 炎性细胞因子

为探究Toll样受体2/4(TLR2/4）、核苷酸结合寡聚结构域样受体1/2(NOD1/2）在产肠毒素大肠杆菌（ETEC）诱导的猪肠道上皮细胞（IPEC-J2）炎症反应中的作用，本研究以不同MOI(0.1、0.02、0.01）的ETEC感染IPEC-J2,2 h后，采用MTT法检测IPEC-J2的细胞活力，以筛选ETEC感染IPEC-J2的最适MOI。结果显示，经MOI 0.01的ETEC感染后IPEC-J2的细胞活力极显著低于对照组（P<0.001）。因此，采用最适MOI 0.01的ETEC感染IPEC-J2，分别培养不同时间后，采用荧光定量PCR(qPCR）检测ETEC感染IPEC-J2中的TLR2/4、NOD1/2及促炎性细胞因子IL-6、IL-8、肿瘤细胞坏死因子（TNF-α)mRNA的转录水平；利用TLR2/4混合抑制剂AMG9810及NOD1/2混合抑制剂NOD-IN-1分别与IPEC-J2共作用6 h，再经ETEC感染2 h后经qPCR检测TLR2/4、NOD1/2及下游促炎性细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α m RNA的转录水平。q PCR结果显示，与对照组相比，ETEC感染的IPEC-J2中TLR2 m RNA转录水平（感染后30 min及120 min）及TLR4 m RNA转录水平（感染后105 min及120 min）均极显著升高（P<0.01、P<0.001），其余时间段与对照组无显著差异；IPEC-J2 NOD1 mRNA转录水平（感染60 min及以后）、NOD2 mRNA转录水平（感染后30 min～120 min）均极显著高于对照组（P<0.01、P<0.001），且IL-6、IL-8（感染后30 min除外）、TNF-α mRNA的转录水平随感染时间延长均极显著升高（P<0.01）。与不加抑制剂的感染组相比，经两种受体抑制剂作用后再感染ETEC的IPEC-J2中TLR2/4、NOD1/2 mRNA的转录水平均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）下降；且其中的IL-6、IL-8、TNF-α mRNA的转录水平均极显著降低（P<0.01）。上述结果首次表明，ETEC感染可通过激活IPEC-J2受体TLR2/4、NOD1/2进而诱导下游促炎性细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α mRNA转录水平的升高。本研究为阐释ETEC诱导猪肠道炎症反应的致病机制提供了参考依据。

• 单位
  动物科学学院; 浙江大学; 西南大学