PMA-qPCR检测十字花科黑斑病菌活菌方法的建立

作者：于璇; 王卫芳; 李献锋; 冯黎霞; 乾义柯; 张承军; 魏霜^*

来源：植物检疫, 2021, 35(04): 49-54.

DOI：10.19662/j.cnki.issn1005-2755.2021.04.009

• 十字花科黑斑病菌
• PMA-qPCR
• 活菌
• 检测

利用叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与实时荧光PCR技术相结合(PMA-qPCR),对PMA质量浓度、暗孵育和曝光时间等因素进行优化,建立了检测十字花科黑斑病菌活菌的方法。结果显示,当PMA质量浓度为10μg/mL,避光条件下孵育5 min、然后曝光10 min,此条件下能够抑制107CFU/mL十字花科黑斑病菌死菌的DNA扩增,对活菌扩增无影响;通过对比qPCR和PMA-qPCR的灵敏度可知,两者灵敏度差异不大,最低检出限均为103CFU/mL;将PMA-qPCR方法用于实际5批十字花科黑斑病菌阳性的油菜籽样品检测,结果显示该方法能准确反映实际样品的带活菌的情况。本研究为十字花科黑斑病菌活菌的检测提供了快速检测方法,可为实验室该病菌的快速筛检提供参考。

• 单位
  广州海关技术中心; 江汉大学