基于直接标记法尿微量白蛋白检测抗体微阵列的构建

作者：王丽梅; 刘必成; 吕林莉; 朱颖; 蔡珂丹; 郑敏

来源：中华肾脏病杂志, 2009, 25(7): 555-560.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-7097.2009.07.016

• 白蛋白尿
• 芯片分析技术
• 抗体
• 免疫比浊法

目的 探讨基于直接标记法的尿微量白蛋白检测抗体微阵列(也称抗体芯片)构建方法,并评价其技术可行性.方法 通过玻片处理、活化、固定等程序构建白蛋白抗体芯片.摸索用生物素标记标准品白蛋白及尿液样本的最佳条件.经封闭后加入生物索标记的标准品向蛋白,孵育,洗涤后加入链酶亲和素-Cy3,再经过孵育、洗涤后,用共聚焦激光扫描仪获取荧光强度值.根据不同浓度标准品白蛋白的荧光信号强度值做出浓度-信号强度曲线,并评价其检测灵敏度、特异性、重复性.收集临床糖尿病患者尿液标本,对尿液样本同时行免疫比浊法和抗体芯片法检测白蛋白值.结果 生物素标记标准品白蛋白和样本的最佳总蛋白/生物素质量比为2:1.根据标准品白蛋白所做出的标准曲线其R2>0.99;捕获抗体浓度为1g/L时,最低白蛋白检测浓度为0.0617 mg/L.阵列内变异系数为3.35%～7.59%;阵列间变异系数为6.78%～9.22%.抗体芯片检测值与免疫比浊法检测值呈正相关(R2=0.9199,P<0.01).结论 成功构建基于直接标记法的抗体芯片,其具有简单、快速、高效、高灵敏度和重复性好等特点;具有开发应用于微量白蛋白尿大规模人群筛查的潜力.

• 单位
  东南大学; 东南大学附属中大医院