牛星状病毒神经型与肠道型ORF2蛋白原核表达及间接ELISA的建立与初步应用

作者：刘海峰; 罗宇航; 李明洋; 刘腾; 董覃婷; 吴翠兰; 彭昊; 钟舒红; 韦祖樟; 李军; 黄伟坚^*; 苏接瑜^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(07): 1356-1362.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.07.08

• 牛星状病毒
• 重组蛋白
• 间接ELISA
• 原核表达

通过GenBank中登录号(神经型BufAstV-GX-NN-ORF2-14、肠道型BufAstV-GX-NN-ORF2-12)合成神经型ORF2-14-1与肠道型ORF2-12-1基因序列，运用PCR技术扩增神经型ORF2-14与肠道型ORF2-12目的片段的基因并克隆到pET-32a(+)载体，成功构建了重组质粒神经型pET-32a-ORF2-14与肠道型pET-32a-ORF2-12,经鉴定正确后转化BL21(DE3)感受态细胞中成功诱导表达，纯化后的重组蛋白利用SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。以纯化的神经型pET-32a-ORF2-14与肠道型pET-32a-ORF2-12重组蛋白为诊断抗原，成功建立牛星状病毒(bovine astrovirus, BoAstV)神经型与肠道型的间接ELISA抗体检测方法。运用建立的间接ELISA对2019-2020年广西省部分地区采集的712份牛血清进行BoAstV抗体的检测，结果显示肠道型共检出170份抗体阳性血清，BoAstV抗体阳性率为23%;神经型共检出124份抗体阳性血清，BoAstV抗体阳性率为17%;其中，2种型共同感染阳性率占总份数10%。结果表明，本试验成功建立了对BoAstV的神经型与肠道型分型检测方法，为临床上对BoAstV分型检测提供良好的检测方法打下基础。

• 单位
  广西壮族自治区兽医研究所; 广西大学