携人ATF6重组腺病毒载体的构建及对C28I2细胞增殖及凋亡的影响

作者：韩晓凤; 张鹏; 李美玲; 夏飞; 郭风劲

来源：医学分子生物学杂志, 2013, 10(4): 187-192.

DOI：10.3870/j.issn.1672-8009.2013.04.001

• 人活化转录因子6
• 重组腺病毒
• C28I2细胞
• 细胞增殖凋亡

目的 构建携带人活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)的重组腺病毒,观察其对软骨细胞C28I2增殖及凋亡的影响.方法 将ATF6基因克隆入pAdTrack-cmv质粒,经pmeⅠ线性化后的重组穿梭质粒pAdTrack-ATF6通过电转法与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183感受态中同源重组,挑选阳性克隆,获得重组腺病毒质粒pAd-ATF6.通过脂质体介导转染HEK-293细胞,得到重组腺病毒Ad-ATF6,并采用PCR法对重组腺病毒进行鉴定.Ad-ATF6感染软骨细胞C28I2,通过Western印迹检测ATF6的表达,并应用流式细胞仪检测Ad-ATF6对C28I2细胞增殖和凋亡的影响.结果 成功构建了携带人ATF6基因的重组腺病毒质粒,并成功包装了具有高效感染力的Ad-ATF6腺病毒.Western印迹结果表明,Ad-ATF6感染组ATF6的表达明显增加.FCM检测结果表明,Ad-ATF6处理组G1期的细胞比例分别比NC组和Ad-GFP组高28.42 %和30.50 %(P＜0.5),S期的细胞比例分别比NC组和Ad-GFP组低22.43 %和24.10 %(P＜0.5);凋亡率比NC组和Ad-GFP组高出21.98 %和19.65 %(P＜0.5).结论 可高表达ATF6的腺病毒包装成功,感染C28I2细胞后,抑制了C28I2细胞的增殖并促进其凋亡,为后续研究ATF6基因的生物学功能奠定了基础,为与内质网应激相关的软骨发育疾病提供了一定的参考价值.

• 单位
  重庆医科大学