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摘要
【目的】制备针对南方根结线虫食道腺蛋白MiPDCD6多克隆抗体，为进一步研究南方根结线虫MiPDCD6蛋白的致病机制提供技术支持和材料准备。【方法】将扩增MiPDCD6基因的功能片段，与原核表达质粒pET-32a(+)构建重组质粒pET-32a-MiPDCD6，然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞进行诱导表达；将纯化的根结线虫Mi PDCD6融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔，获得高效价高纯度的多克隆抗体。【结果】构建的重组质粒pET-32a-MiPDCD6转化大肠杆菌BL21细胞后，在诱导剂IPTG浓度1.0 mmol·L-1、摇床温度37℃、转速150r·min-1和振荡培养5 h条件下，成功表达MiPDCD6融合蛋白。ELISA和SDS-PAGE检测表明：将纯化的根结线虫Mi PDCD6融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔，获得高效价高纯度的多克隆抗体，效价约为1∶50 000。【结论】明确了MiPDCD6基因原核表达条件；制备获得的根结线虫MiPDCD6蛋白的多克隆抗体效价和纯度较高，可用于后续研究MiPDCD6蛋白在南方根结线虫致病机理中发挥的功能。
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