金银花ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作者：王晓明; 李俊彬; 李永欣; 曾慧杰

来源：中国农学通报, 2008, (11): 73-77.

• 金银花
• ISSR
• 反应体系
• 优化 Honeysuckle
• ISSR
• reaction system
• optimization

以金银花叶片基因组DNA为模板,通过单因素试验,研究了退火温度、Taq DNA聚合酶的用量及模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+浓度等6种因素对ISSR-PCR扩增的影响,建立了适合于金银花IS-SR-PCR反应体系和扩增程序,即在20μl反应体系中,内含1×PCR反应缓冲液(Mg2+free)、1.5UTaq DNA聚合酶、0.15mmol/L dNTPs、0.4μmol/L引物、1.5mmol/LMgCl2、60ng模板DNA。确定了适宜的退火温度为49.9℃。扩增程序为94℃预变性5min;35个循环为94℃变性30s,49.9℃退火30s,72℃延伸1.5min;最后72℃延伸7mi...

• 单位
  湖南省林业科学院; 中南林业科技大学