BARF1基因真核表达载体PIRES2-EGFP/BARF1的构建及鉴定

作者：李淑英; 张科; 杜海军; 王湛; 李旭坤; 慈雅丽; 王新燕; 张秀军; 周玲

来源：辽宁师范大学学报(自然科学版), 2011, (01): 98-101.

• EB病毒
• BARF1基因
• 真核表达载体 Epstein-Barr virus
• BARF1 gene
• eukaryotic expression vector

提取B95-8细胞RNA,进行逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切,电泳回收BARF1片段.同时用EcoRI和BamHI双酶切真核载体PIRES2-EGFP,电泳后回收载体PIRES2-EGFP并与BARF1片段连接;转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆.提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切鉴定插入方向,并进行测序分析.转染胃上皮细胞GES-1后,观察细胞形态与行为变化....

• 单位
  传染病预防控制国家重点实验室; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 华北理工大学