利用串联亲和纯化的方法筛选耻垢分枝杆菌中MutM的相互作用蛋白

作者：范尚华; 周盈; 张泓泰; Joy Fleming; 喻子牛; 张先恩; 毕利军

来源：生物化学与生物物理进展, 2015, 42(10): 935-946.

DOI：10.16476/j.pibb.2015.0065

• 耻垢分枝杆菌
• 碱基切除修复
• MutM
• 串联亲和纯化

Mut M(formamidopyrimidine-DNA glycosylase,Fpg)是原核生物碱基切除修复系统(BER)中同时具有DNA糖苷酶和脱嘌呤/脱嘧啶AP裂解酶活性的一种双功能酶,不但可以识别DNA损伤,而且能切除损伤的碱基,从而参与到许多种损伤的修复过程.除了高致突变率的8-羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine,8-oxo G)外,Mut M在其他损伤修复中具体作用机制还不清楚.本研究主要以耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)为研究对象,利用串联亲和纯化技术和质谱相结合的方法对可能与Mut M相互作用的蛋白因子进行发现和鉴定,并于体外用Far-western和GST pull-down方法对鉴定出的蛋白DEAD-box rna helicase、Rps C、Uvr A与Mut M的相互作用进行了验证.实验结果表明,利用串联亲和纯化方法来发现Mut M相互作用的蛋白是切实可行的.本研究为进一步深入研究Mut M在其参与的损伤修复中的具体机制提供了切入点.

• 单位
  中国科学院生物物理研究所; 生命科学技术学院; 华中农业大学; 生物大分子国家重点实验室; 农业微生物学国家重点实验室