地衣芽孢杆菌角蛋白酶kerA基因的异源表达及性能研究

作者：辛青龙; 刘业学; 何光明; 王兴吉; 曹珊; 李玉^*

来源：中国皮革, 2018, 47(12): 28-34.

DOI：10.13536/j.cnki.issn1001-6813.2018-012-005

• 地衣芽孢杆菌
• 角蛋白酶KerA
• 解淀粉芽孢杆菌
• HPLC
• 酶学性质

从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) ATCC16580中克隆得到角蛋白酶基因kerA,将其构建在芽孢杆菌表达载体p LIYU-2上,再转化到解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) TCCC111018中,构建出高产角蛋白酶重组菌株TCCC111018/p LIYU-2-kerA。重组菌株在羽毛发酵培养基中12h内即可将羽毛全部降解,在摇瓶发酵培养基中36h酶活力达到1 361. 54U/m L。重组角蛋白酶最适温度为65℃,最适p H值为9,在40～60℃和p H值9～11范围内具有良好的稳定性。蛋白电泳(SDS-PAGE)分析表明,重组角蛋白酶分子质量约为31kD。Na+,K+、Ca2+及Mg2+能显著促进角蛋白酶活力,Cu2+和Fe3+对重组角蛋白酶有明显的抑制作用。高效液相色谱(HPLC)分析显示,羽毛酶解液中以缬氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸为主,另外也含有较多的酪氨酸和胱氨酸,游离氨基酸浓度为14. 59μmol/m L。

• 单位
  生物工程学院; 天津科技大学; 工业发酵微生物教育部重点实验室; 材料学院