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摘要
构建了重组双功能水蛭素 (Recombinant RGD Hirudin、r RGD Hirudin )cDNA的表达质粒RGD Hirudin pPIC9K ,转化入毕赤酵母中 ,经筛选得到高表达的阳性克隆。种子菌经过 3d发酵培养 ,其培养液上清经超滤浓缩、凝胶过滤层析和离子交换层析后 ,得到纯度大于 97%、比活性为 12 0 0 0ATU mg的r RGD Hirudin ,回收率大于 6 0 % ,发酵产率为 1g L。纯化后的r RGD Hirudin经过还原SDS PAGE ,抗凝血酶活力分析、抗血小板聚集分析、质谱分析及等电聚焦分析等方法鉴定 ,证明该表达产物为水蛭素的衍生物 ,具有抗凝血酶和抗血小板聚集双重功能。
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单位分子医学重点实验室; 复旦大学
