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摘要
目的探讨黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)蛋白激活树突状细胞(DC), 然后诱导产生CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)进行免疫治疗肝细胞癌(简称肝癌)的效果。方法利用MAGE-A3蛋白诱导DC成熟并检测DC表面标志物及白细胞介素(IL)-10、IL-12表达, 然后利用成熟的MAGE-A3-DC诱导MAGE-A3特异性CD8+CTL, 并检测MAGE-A3-DC-CD8+CTL对正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2的杀伤作用。建立BALB/c-nu/nu肝癌模型, 检测MAGE-A3-DC-CD8+CTL对小鼠肿瘤的抑制作用, 并通过病理学切片观察肿瘤组织变化。结果 MAGE-A3蛋白刺激能够显著上调DC表面标志物DC80、DC83、DC86和人类白细胞抗原DR基因(HLA-DR)水平(97.45±2.58比48.33±1.68, 92.81±2.36比52.92±1.90, 94.00±3.01比53.97±2.05, 92.16±1.87比34.13±1.32;t=35.680, P=0.013;t=29.440, P=0.021;t=24.580, P=0.012;t=56.690, P=0.009);与磷酸盐缓冲液(PBS)刺激的DC比较, MAGE-A3蛋白能够显著促进DC释放IL-12[(338.44±18.15) pg/ml比(243.23±16.56) pg/ml;t=8.670, P=0.005]和显著抑制IL-10的释放[(207.21±10.89) pg/ml比(327.58±14.36) pg/ml;t=14.930, P=0.009]。MAGE-A3-DC-CD8+CTL和DC-CD8+CTL展示了相近的L02细胞杀伤效果[(9.10±1.40)%比(9.71±1.58)%;t=0.650, P=0.120], 与DC-CD8+CTL比较, MAGE-A3-DC-CD8+CTL展示了显著的HepG2细胞杀伤效果[(58.84±5.27)%比(9.63±1.61)%;t=19.970, P=0.008]。BALB/c-nu/nu肝癌小鼠经过MAGE-A3-DC-CD8+CTL治疗后, 肿瘤体积比显著低于PBS组和DC-CD8+CTL组(5.43±1.22比21.81±2.01比22.85±2.40;t=22.030, P=0.010;t=20.460, P=0.012)。苏木素-伊红(HE)染色结果显示, 经过MAGE-A3-DC-CD8+CTL处理的肿瘤组织细胞核固缩, 细胞间隙增大, 出现空泡和水肿现象, 而PBS组和DC-CD8+CTL组肿瘤组织无病理学改变。结论 MAGE-A3蛋白能够刺激DC细胞成熟并诱导产生MAGE-A3蛋白特异性CD8+CTL, MAGE-A3-DC-CD8+CTL具有特异性的肿瘤杀伤能力。
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单位河南省肿瘤医院; 郑州大学
