siRNA沉默Rsk2基因表达抑制人牙周膜细胞的增殖及成骨分化

作者：杜莉; 曹伟靖; 王原明

来源：上海口腔医学, 2017, 26(05): 498-503.

DOI：10.19439/j.sjos.2017.05.007

• Rsk2
• 人牙周膜细胞
• siRNA
• 增殖
• 成骨分化

目的:研究核糖体S6激酶2(ribosomal S6 kinase,Rsk2)基因对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLCs)增殖及成骨分化的影响及其作用机制。方法:收集牙科手术拔除的前磨牙,分离其牙周韧带并进行h PDLCs原代培养,取第46代细胞用于实验。采用RT-PCR和Western印迹法检测小干扰RNA(siRNA)对h PDLCs内Rsk2的沉默效率,MTT法检测Rsk2 siRNA对细胞增殖的影响,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性变化。p38MAPK信号通路抑制剂SB203580处理转染后的h PDLCs,Western印迹法检测Rsk2 siRNA对MAPK信号通路p38蛋白磷酸化的影响。RT-PCR和Western印迹法检测成骨分化标志分子Runt相关转录因子2(Runtrelated transcription factor-2,Runx2)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)和成骨蛋白BMP2的表达情况,采用SPSS18.0R软件包对数据进行统计学分析。结果:h PDLCs转染Rsk2 siRNA后,Rsk2表达下调,差异显著(P<0.05)。Rsk2 siRNA显著降低p38蛋白磷酸化(P<0.05),抑制h PDLCs增殖(P<0.05),降低ALP活性(P<0.01),成骨分化标志分子Runx2、OCN和BMP2的表达降低,差异具有显著性。SB203580处理Rsk2 siRNA转染后的h PDLCs发现,细胞增殖、ALP活性、Runx2、OCN和BMP2的表达较Rsk2 siRNA转染组相比,均有显著差异。结论:Rsk2 siRNA通过p38MAPK信号通路抑制h PDLCs增殖和成骨分化。

• 单位
  延安大学附属医院