蓝氏贾第鞭毛虫末端结合蛋白1基因的克隆与原核表达

作者：李汶霖; 王鸿斌; 李淑凝; 王洋^*; 李志敏; 沈海娥; 刘红宁; 李幽美; 赵旭安

来源：热带病与寄生虫学, 2020, 18(01): 21-24.

• 蓝氏贾第鞭毛虫
• 末端结合蛋白1
• 原核表达

目的克隆并原核表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lambia,简称贾第虫)末端结合蛋白1(End-binding protein 1,geb1)基因,获得重组gEB1蛋白。方法由于geb1基因无内含子,我们以C2株贾第虫基因组为模板,以国际标准株WB株geb1基因序列为参考序列,设计引物克隆geb1基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切与原核表达载体p ET-28α(+)连接,转化感受态E.coli TOP10,经筛选和测序验证后导入大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导gEB1蛋白表达,产物经SDS-PAGE和Western blot进行检测和验证。结果成功构建了表达C2株贾第虫geb1基因的原核表达载体pET-28α(+)-gEB1,转化入大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3),重组菌株经0.1 mmol/L IPTG,30℃低温诱导5 h,SDS-PAGE和Western blot显示,在相对分子量约29 KDa的位置出现目的蛋白条带,与理论值一致。结论用大肠杆菌成功表达了gEB1蛋白,为gEB1蛋白的功能研究和抗体制备提供了材料。

• 单位
  生命科学学院; 华北理工大学