293T细胞中SQSTM1/p62-GFP的表达及其与LC3在诱导自噬状态下的定位分布

作者：游金; 杨光铭; 徐丽明; 罗达; 卢春花

来源：基因组学与应用生物学, 2020, 1-9.

• p62/SQSTM1
• LC3
• 293T
• 细胞自噬 p62/SQSTM1
• Autophagy

为探究SQSTM1/p62蛋白在细胞发生自噬时的定位，以人肺腺癌A549细胞的cDNA为模板，PCR扩增SQSTM1基因(编码p62蛋白)并将其插入pEGFP-N1真核表达质粒。将重组质粒转染进入人胚肾293T细胞中表达p62绿色荧光融合蛋白(GFP-p62)，利用Earle's 盐平衡溶液饥饿诱导细胞自噬，Western blotting和激光共聚焦显微镜检测GFP-p62的表达及其与自噬相关蛋白LC3在自噬细胞中的定位。结果发现，重组载体pEGFP-N1-p62转染293T细胞后，293T细胞能高效表达GFP-p62融合蛋白，内源性p62所占细胞内总p62比例很低。饥饿诱导后细胞自噬体形成...

• 单位
  广西大学