科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的 构建人线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达质粒，进行蛋白表达和纯化，制备兔抗多克隆抗体并进行初步鉴定。方法 构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达质粒，转化至BL21(DE3)大肠杆菌，采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。提取蛋白包涵体，并用8 mol/L尿素溶解，His-NTA柱纯化。获得纯化SLC25A28蛋白免疫新西兰大白兔制备SLC25A28多克隆抗体，Western blot法鉴定SLC25A28抗体特异性。结果 成功构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达载体质粒，并在BL21(DE3)大肠杆菌中成功诱导表达SLC25A28蛋白，蛋白纯度约为90%, Western blot法证明制备的抗体能特异性识别小鼠睾丸组织中的SLC25A28蛋白。结论 成功对人SLC25A28进行了原核表达，并制备了具有特异性的兔抗人SLC25A28多克隆抗体。
-
单位基础医学院; 中国人民解放军空军军医大学
